尊龙凯时的人小胶质细胞HMC3培养指南旨在为研究人员提供有效的细胞培养条件和操作步骤，以便于获得优质细胞培养效果。

一、细胞培养条件

细胞名称：人小胶质细胞HMC3
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM+10%FBS+1%P/S
传代方法：初次建议1:2传代。若传代情况良好，可以选择2天换液。
备注：收集瓶子内的培养基，以便与后续培养进行对比。如效果不佳，建议直接选用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理方法

细胞在运输后，需要进行合理处理。待细胞状态良好后，应将培养瓶装满完全培养液，并密封瓶口，以确保最佳运输效果。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后放置于超净台进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱内，静置3-4小时以稳定细胞状态。建议显微观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保留（最好40x、100x、200x各一张）。前三天的照片为重要售后依据，不提供照片则默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基在37℃、5% CO2中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，然后观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，迅速回操作台，加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后，加5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液，混匀后转入冻存管中。
4. 直接将冻存细胞存入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，请先在-80℃保存24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴解冻，至冻存管内无结晶后，外部用75%酒精擦拭。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶内，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

一些细胞可能在运输过程中因贴壁不牢而脱落，此为正常现象。若脱落较多，可以将培养液收集至离心管，进行1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养，并加入1-2ml胰酶，轻轻吹打消化1-2分钟，随后加5ml完全培养基终止酶活性，再离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

尊龙凯时承诺在细胞出现问题时，将根据情况进行合理处理：

1. 若因运输过程中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，将提供重发服务。
2. 若在收到细胞48小时内发现污染问题，并提供真实的实验结果，我们核实后将予以重发。
3. 常温发货或干冰冻存发货的细胞在特定时间未存活，且提供真实清晰的细胞状态照片，会重发。
4. 因客户操作不当或不符合推荐的培养体系，导致的细胞状态不良，将不予以重发。
5. 在收到细胞当天及之后的两天内拍照记录，以便售后服务使用。

如需了解更多信息，欢迎访问尊龙凯时官方网站。