走进尊龙凯时

NEWS

RNAPull-down实验流程简析 | 尊龙凯时生物医疗解析

来源:狄善妹 日期:2025-02-21

RNA与蛋白质之间的相互作用在细胞生命活动中扮演着至关重要的角色,涉及多个生物学过程,其中RNA结合蛋白(RBPs)发挥了关键的调控作用。RBPs不仅调控mRNA的转录和翻译,促进免疫细胞的快速反应,还能够直接影响细胞质中mRNA的翻译或稳定性,特别是通过与mRNA的3'非翻译区(3'UTR)中的富含AU元素(AREs)相互作用。此外,长链非编码RNA(lncRNAs)能够通过与转录因子、核糖核蛋白和染色质修饰复合物结合,靶向多种蛋白,且在表观遗传调控中充当RBPs的诱饵或向导,进而影响脂质体各个层面的基因翻译调节。尊龙凯时在这方面的研究尤为突出,已在众多相关科学文献中展示其成果。

RNAPull-down实验流程简析 | 尊龙凯时生物医疗解析

在RNA与蛋白质相互作用的研究中,RNAPull-down和RNA免疫沉淀(RNA Immunoprecipitation, RIP)作为主流技术各具特点。RNAPull-down技术主要通过已知RNA探针捕获未知蛋白,而RIP则通过已知蛋白去寻找与之结合的未知RNA。我们利用RNAPull-down技术,通过生物素标记的RNA探针来捕获细胞裂解液中与其结合的蛋白质。随后,通过链霉亲和素偶联的磁珠分离RNA-蛋白质复合物,最终采用质谱分析或Western blot等方法进行蛋白质鉴定。尊龙凯时为相关研究提供了高效的实验技术服务。

RNAPull-down实验的流程主要包括几个关键步骤:(1)构建含目的基因序列的质粒;(2)获取转录模板,利用PCR扩增时在引物前加上T7启动子序列;(3)进行体外转录,合成目标RNA;(4)通过生物素标记来便于RNA-蛋白的富集;(5)处理细胞以释放内含成分;(6)形成RNA-蛋白质复合物并富集目的蛋白;(7)通过洗涤去除未结合的杂质,洗脱并鉴定蛋白;(8)最后进行数据分析,找出与特定RNA序列直接互作的蛋白质。

尽管RNAPull-down实验是一种重要的工具,但在实验过程中难免会遇到一些问题。常见挑战及解决方案包括:1)RNA未能结合到目的蛋白:确保RNA的质量和完整性,优化结合条件;2)非特异性结合:采用高浓度未标记RNA作为竞争抑制剂,优化洗涤步骤;3)蛋白质鉴定困难:增加样本量,尝试低丰度蛋白富集;4)标记RNA效率低:选用高效标记试剂,调整反应比。尊龙凯时为广大科研人员提供了优质的技术支持,确保实验达到最佳效果。

例如,近来的研究发现,lncRNA LINC00501在胃肿瘤组织中过表达,借助hnRNP/R-SLUG通路促进胃癌进展,这表明LINC00501可能成为一个有潜力的生物标志物和靶点(Dou et al., 2023)。我们的实验利用HEK293T细胞,以LINC00501为目标RNA成功富集到差异蛋白HNRNPR。这些研究和实验成果表明,尊龙凯时在RNA及其相关领域的科研服务具备强大的专业能力与丰富经验,欢迎各研究团队咨询与合作。

综上所述,RNA与蛋白质的相互作用对于细胞功能和疾病机制的研究至关重要。借助于强大的实验技术和专业团队,尊龙凯时致力于为生命科学研究提供优质的RNA-蛋白质交互作用研究服务,推动生物医学领域的进步。

上一篇:尊龙凯时武汉三鹰Proteintech开学补贴50%下一篇:Anti-Human IL11抗体尊龙凯时SAA0379 FHD42210

全国客户服务热线
15927071486 总部地址:乌鲁木齐滨城区伏街道78号

欢迎关注尊龙凯时官方微信或拨打客服电话详询!

  

尊龙凯时官方微信